生物（wù）實驗室常識
2021-02-10 10:58:03
保存在冰箱中的酚，容（róng）易被空氣氧（yǎng）化而變成粉紅（hóng）色，這樣的酚容易降解DNA，一般不可以使用。為了防止酚的氧化，可加入0.1%的8-羥基（jī）喹啉及少量巰基乙醇。8-羥基喹啉是帶有（yǒu）淡黃色的固體粉沫，不僅能抗氧化（huà），並在一定（dìng）程度上能抑製（zhì）DNase的活性。
2.如何（hé）將不同構型的質粒DNA區別開？
由於不同構型的DNA在（zài）瓊脂（zhī）糖凝膠電（diàn）泳中的（de）遷移率不同，ccc DNA的泳動速度（dù）最快，通過凝（níng）膠電泳方法可將不同構型（xíng）的（de）DNA區（qū）別開。
3.用酚-氯（lǜ）仿抽（chōu）提細胞基因（yīn）組DNA時，通常要在酚（fēn）-氯仿中加少（shǎo）許異戊（wù）醇，為什麽（me）？
異戊醇可以降低表麵張力，從而減（jiǎn）少氣泡產生。另外，異（yì）戊醇有（yǒu）助（zhù）於分相，使離心後的上層含DNA的水相（xiàng）、中間的變性蛋白相及下層（céng）有機溶劑相維持穩定。
4.用乙醇沉澱DNA時，為什麽加入單價的陽離子？
用乙醇（chún）沉澱DNA時，通常要在溶液中加入單價的陽離（lí）子，如（rú）NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的負電荷，減少DNA分子之間的同性電荷相（xiàng）斥力，而易於聚集沉（chén）澱。
5.在（zài）提（tí）取RNA時經常使用異硫氰酸胍，有什麽作用？
RNA是一種極易降解的核酸分子。高濃度強變性劑異硫氰酸胍使細胞結構迅速被破（pò）壞（huài），使RNA從細胞中（zhōng）釋放出來。同時高濃度異硫氰酸（suān）胍還使細胞內（nèi）的RNA酶失活，使釋（shì）放出的RNA不被降解。
6.蛋白（bái）印跡中封閉（bì）液的作用？
封閉液的作用是（shì）封閉未吸附蛋白的部（bù）位，以減少非特異性結合背景的影響。常用的封閉液有脫脂奶粉、小牛血（xuè）清等。
7.DNA通常保（bǎo）存在什麽緩（huǎn）衝液中？
采用TE緩衝液，Tris-HCl的緩衝係統，加入EDTA可以螯合二價金屬離子進而抑製（zhì）依賴於二價金屬離子的DNA酶（méi）的活性，對DNA起到保護作（zuò）用。
8.在酶切（qiē）反應緩衝液中為什麽加入BSA？
通過提高溶液中（zhōng）蛋白（bái）質的濃度（dù），對酶起保護作用。
9.簡單的克隆載體必需包括什麽？
複製起點；選擇標記：主要是抗性基因；多克（kè）隆位點：便於外源DNA的（de）插（chā）入。
10.用酚抽提細胞DNA時，有（yǒu）什麽作用（yòng）？
使蛋白質變性。
11.在分離DNA時，要使用EDTA，為什麽？
EDTA是金（jīn）屬離子螯合（hé）劑，螯合二價離子，抑製核酸酶（méi）的活性。
12.在分離DNA過程中，造（zào）成DNA分子斷裂（liè）的因素有哪些？
核酸酶降解；化學降解；物理剪切。
13.使（shǐ）用離心機（jī）應注意什麽（me）？
首先應該根據自己的實驗需（xū）求（qiú）選（xuǎn）擇合適的離心機和轉（zhuǎn）子以及離心管，使用離心機時的工作轉速不應該超過離心機、轉子以及離心管的最大允許轉速。離心前注意嚴格平衡樣品。安裝轉子和轉子蓋要規範、準確。離心時要留人看守，發（fā）現（xiàn）離（lí）心機（jī）異常應立即關閉離心機。離（lí）心結（jié）束後要安放好轉子。
14.分子生物學實驗（yàn）室常用的滅菌方法有哪些？
高壓蒸汽滅菌、幹熱（rè）滅菌、化學藥劑消毒、過濾除菌
15.使用移液器有哪些注意事項？
垂直吸液、慢吸慢放（fàng）；選擇合適的量（liàng）程範圍，不能超過量程使用；選擇與移液器（qì）匹配的槍頭，安裝槍頭（tóu）時不要用力太猛；移液器每日用完後，應旋（xuán）到最大刻度。