如（rú）何建立一個PCR實驗室（shì）
為了對以個特定序列進行（háng）PCR做重複檢（jiǎn）測，需要三個不同的區域，每一個區域的具體技術操作和試劑在下麵（miàn）詳細列出。
1、樣品準（zhǔn）備區
這個區域專門用作樣品的準備，在製備（bèi）和操作用於核酸提取的試劑時應該采取預防措施：
1)PCR產物和帶有要擴增序（xù）列（liè）的DNA克隆不能在這個房（fáng）間操作。
2)組織（zhī）培養物、組織標本和血清樣品都（dōu）帶進樣品準備間（jiān）處理，以根據應用的需要提取DNA或RNA。
3)用於樣品處理的工具不能被用作普通分子克（kè）隆的工具，也不能（néng）用作操作靶序列。
4)DNA樣品應該用有專門（mén）的防護或正壓活塞式移液管操作，以防止在吸取樣品時有氣溶膠遺留。
5)大體積樣品應該（gāi）用單獨包裝的無菌一次性移液（yè）管吸取。
6)管子打開前（qián）都要簡短離心以減少氣（qì）溶膠的產生，而且管子不能（néng）用力崩（bēng）開，這樣會產生氣溶膠。
7)任何時候都（dōu）應該穿實驗服和帶手套，手套要經（jīng）常（cháng）更換，尤（yóu）其在抽提過程（chéng）中（zhōng）每一步之間都要更換。實驗服要專門用於樣品準備間，經常清洗。
2、樣品準備和RNA-PCR
RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作（zuò），這樣（yàng）增加了樣品之間（jiān）汙染的機會。為了避免這一問題，反轉錄一步可以在樣品（pǐn）準備區（qū）進行。在（zài）RNA-PCR中應用UNG以（yǐ）防止（zhǐ）汙染的方法也（yě）有報道。
3、前PCR區
必須有專門用於準備各種反應的區域，這個區域必須保持幹淨，而且沒有（yǒu）來自克隆和樣品準備的汙染。前（qián）PCR區必須要有試劑和準備，特別是專（zhuān）門用於前PCR區的正壓活（huó）塞式移液管。
4、PCR實驗室試劑的操作
1)所用的所有溶液（yè）都應該沒有核酸和(或)核（hé）酸（suān）酶（méi）(DNase和RNase)汙染。
2)所有（yǒu）PCR試劑中使用的（de）水（shuǐ）都（dōu）應該是高質量的-新鮮蒸餾的去離子水，用（yòng）0.22μm過濾的，並且是高壓滅菌（jun1）。
3)在20℃到25℃貯存的試劑建議加點像疊氮鈉一類的（de）抗微（wēi）生物劑，在擴增試劑或樣品製備試劑（jì）中（zhōng）加（jiā）入0.025%的疊氮（dàn）鈉不抑製擴增反應。
4)所用試劑都（dōu）應該（gāi）以大體積配製，實驗一下看試劑是否滿意，然後分裝成（chéng）僅夠一次使用的量進行貯存。
5)所有試劑和（hé）樣品準備過程中都要（yào）使用一次（cì）性滅菌的瓶子和管子。
6)新配製的試劑（jì）在用於準備新的標本之前應該加以檢驗。
7)樣品準備和前（qián）PCR區所（suǒ）使用的移液管在不使用時都應（yīng）該小心保（bǎo）存。
5、在前PCR區建（jiàn）立PCR混合物
1)可以把即刻可用的“主混合物”溶液配（pèi）好、分裝並保存在-20℃或4℃，在實驗室隻涉及（jí）到擴增一種或少（shǎo）數幾種特異序列時這（zhè）樣做很有用。
2)如果你（nǐ）的實（shí）驗室使用多套引物，以致於配製包括所有試劑的單（dān）一反應混合物不夠經濟，可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。
3)作為一個規則，應該保存一套陰性、弱陽性和強陽性對照樣品來分析樣（yàng）品配製和PCR前過程的效率和潔淨程度。而且，你也希望通過使用一個已知（zhī）的弱陽性樣品來驗證（zhèng）你的樣品（pǐn）緩衝液以證明裏麵（miàn）不含擴增抑製物。
4)陰性樣品要與每組（zǔ）樣品（pǐn）同時做，以分析是否存在樣品與樣（yàng）品之間的汙染以（yǐ）及是否存在PCR產物的汙（wū）染（rǎn），陰性對照應該包括核酸以外的所有試劑。
5)當做陽性對照時，有（yǒu）兩個（gè）理由決定了應該使用最（zuì）少數量的核酸。
6)由於必（bì）須有（yǒu）對照（zhào）反應，對照模板的特點應該予以考慮。
6、控製汙染的方法
已（yǐ）設計出很有力（lì）的酶（méi）學方（fāng）法用來消除一種形式的汙染—使用UNG，這一技術能有效地消除由PCR產物引起的汙染。另一種控製汙染的方法是使用紫（zǐ）外線，這種方法不能完（wán）全消除汙染問題，但可以將汙染（rǎn）降低幾個（gè）數量級。
7、PCR儀的位置
8、後PCR區
PCR完成以後，需要分析樣品並解釋數（shù）據（jù），應該留出一個專（zhuān）門用於反應後處理樣品的地方。後PCR活動中使（shǐ）用的所（suǒ）用試劑、一次性耗材和儀器都必須是專門用於這（zhè）一目的，決不能把實驗室（shì）這一區域的試劑或儀器用於任何前PCR活動。